Colorazione
La colorazione, durante un'analisi citoistochimica, è l'insieme di tecniche che servono a far risaltare, per mezzo di opportuni coloranti, le strutture cellulari del campione. Attraverso la colorazione è possibile distinguere, all'interno della cellula, le varie strutture apprezzandone la morfologia, la quantità e la disposizione. L'utilizzo delle tecniche di colorazione può servire sia a fini conoscitivi, ad esempio per comprendere la disposizione delle strutture cellulari, sia per fini diagnostici. In quest'ultimo caso, ad esempio, è possibile servirsi dei coloranti per rilevare strutture anomale o patologiche.
Le tecniche di colorazione possono variare in base al tipo di analisi e al campione da trattare. In linea generale, il campione deve essere idratato poiché la maggior parte dei coloranti si scioglie in acqua e, per questa ragione, la cellula o il tessuto deve possedere una sufficiente quantità di acqua all'interno affinché il colorante possa aderire alle strutture.
I coloranti possono essere naturali, ad esempio estratti da piante, o artificiali. Ciascun colorante è specifico per poche strutture e l'affinità è basata sulle proprietà chimiche.
Classificazione dei coloranti
I coloranti possono essere classificati in base alla loro struttura chimica; si definiscono coloranti acidi l'insime di molecole che reagiscono con strutture basiche, e coloranti basici le molecole maggiormente affini per le sostanze acide.
Nome | Tipo | Affinità |
Basico | Colora il nucleo ed il RER di blu-viola | |
Eosina | Acido | Colora il citoplasma in rosa, rosa chiaro e gli eritrociti in rosso. |
Blu di toluidina | Anfotero | Colora il nucleo di blu-viola. Colora gli acidi nucleici di blu-viola. Colora il citoplasma di blu-viola. Colora alcuni polisaccaridi di rosso. |
Fucsina acida | Acido | Colora gli eritrociti in arancione. Usata nella colorazione del tessuto connettivo. |
Violetto metile | Acido | Colora l'amiloide in viola. |
Verde luce | Basico | Colora le fibre collagene in verde. |
Blu alcian | Basico | Colora alcune mucosostanze (glicosaminoglicani) in blu. |
Rosso congo | Anfotero | Colora i nuclei in blu. Colora l'amiloide in rosso. Colora il connettivo in rosso. |
Blu di metilene | Basico | Colorante usato nella colorazione di Gram ed in altre colorazioni. Ha una blanda attività e viene preferito nelle cosiddette colorazioni “in vivo”. |
Microscopia ottica
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Fissazione: Soluzione di Bouin.
Disidratazione: alcoli crescenti.
Taglio: microtomo, ultramicrotomo.
Colorazione: colorazione ematossilina-eosina (ematossilina, eosina), colorazione tricromica di Mallory.
Differenziazione dei carboidrati: reazione PAS e reazione alcian blue (mucopolisaccaridi), test di Tollens, test di Fehling, lectine e ABC vectastain.
Altre differenziazioni: Colorazione delle proteine, colorazione degli acidi nucleici, colorazione dei lipidi.
Osservazione: Microscopio ottico, microscopio a fluorescenza.