Colorazione ematossilina-eosina
La colorazione ematossilina-eosina, spesso abbreviata in EE, è un tipo di tecnica di differenziazione largamente utilizzata in istologia e nella microscopia ottica che serve per la cosiddetta colorazione morfologica, che permettere di distinguere interi organuli cellulari.
La colorazione si basa sulla capacità dei due coloranti di differenziale molte strutture, a causa della diversità chimica e di affinità per gli elementi endocellulari.
L'ematossilina è un colorante basico, che colora il nucleo di un colore tendente al bluastro; l'eosina è, invece, acida e per questa ragione colora il citoplasma di una tonalità tendente al rosa.
L'ematossilina non è direttamente coinvolta nella colorazione del campione, il cromoforo attivo è l'emateina che deriva dall'ossidazione dell'ematossilina.
In base al tipo di miscela è possibile utilizzare differenti tipi di soluzione ematossilinica, la più utilizzata è l'emallume di Mayer, una miscela formata da allume di potassio, ematossilina, iodato di sodio, acido citrico e tricloroacetaldeide (cloralio).
Indice
Protocollo
Il protocollo può variare leggermente in base al tipo di campione trattato, oppure alle esigenze del laboratorio. In linea generale, per la colorazione con EE si osservano i seguenti passaggi.
- Due o tre passaggi in xilolo per cinque minuti;
- Due o tre passaggi in alcol etilico assoluto per cinque minuti;
- Alcoli decrescenti fino al 70° per cinque minuti;
- Passaggio in acqua di fonte per circa un minuto;
- Due passaggi in acqua distillata per circa un minuto;
- Colorazione con ematossilina per circa un minuto;
- Lavaggio in acqua corrente per un minuto;
- Colorazione con eosina per circa un minuto;
- Passaggio veloce in acqua distillata;
- Disidratazione, operando una con gli alcoli crescenti;
- Diafanizzazione con xilolo;
- Montaggio, generalmente con eukitt
- Asciugatura e osservazione al microscopio ottico.
Microscopia ottica
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Fissazione: Soluzione di Bouin.
Disidratazione: alcoli crescenti.
Taglio: microtomo, ultramicrotomo.
Colorazione: colorazione ematossilina-eosina (ematossilina, eosina), colorazione tricromica di Mallory.
Differenziazione dei carboidrati: reazione PAS e reazione alcian blue (mucopolisaccaridi), test di Tollens, test di Fehling, lectine e ABC vectastain.
Altre differenziazioni: Colorazione delle proteine, colorazione degli acidi nucleici, colorazione dei lipidi.
Osservazione: Microscopio ottico, microscopio a fluorescenza.